Poli(A) polimeraza alfa je enzim koji je kod ljudi kodiran genom PAPOLA.
Primjenom fluorescentne in situ hibridizacije i radijacijskom hibridnom analizom, Yamauchi et al. (1999) locirali su gen PAP na poziciji 14q32.1-q32.2.Yamauchi, T., Sugimoto, J., Hatakeyama, T., Asakawa, S., Shimizu, N., Isobe, M. Assignment of the human poly(A) polymerase (PAP) gene to chromosome 14q32.1-q32.2 and isolation of a polymorphic CA repeat sequence. J. Hum. Genet. 44: 253-255, 1999. PubMed: 10429366
PAPOLA se veže za FIP1L1 (Faktor koji djeluje u interakciji s PAPOLA i CPSF1), podjedinicu faktora specifičnosti cijepanja i poliadenilacije (CPSF1). Ovaj složeni poliadenilirajući 3' kraj je prekursor iRNK (pre-iRNK) (vidi CPSF). CPSF1 je proteinska RNK koja se prerađuje i veže se za sekvence bogate uracilom u pre-iRNK. Veže se i stimulira aktivnost polinukleotid adenililtransferaza i time dodaje adenililne ostatke pre-mRNK. Ovo djelovanje poli-adenilila povećava sazrijevanje i pomicanje pre iRNK iz jedra u citoplazmu, dok dramatično povećava stabilnost iRNK nastale iz pre-iRNK: FIP1L1 je faktor 3'-završne prerade pre-iRNK. Fuzije gena FIP1L1 između njega i PDGFRA (PGDFRA) ili receptora retinojske kiseline (RARA) su uzročni geni određenih ljudskih bolesti povezanih s patološki povećanim nivoom eozinofila u krvi i/ili leukemija.https://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/81608
Aminokiselinska sekvenca Dužina polipeptidnog lanca je 745 aminokiselina, a molekulska težina 82.843 Da .
1020304050 MPFPVTTQGSQQTQPPQKHYGITSPISLAAPKETDCVLTQKLIETLKPFG VFEEEEELQRRILILGKLNNLVKEWIREISESKNLPQSVIENVGGKIFTF GSYRLGVHTKGADIDALCVAPRHVDRSDFFTSFYDKLKLQEEVKDLRAVE EAFVPVIKLCFDGIEIDILFARLALQTIPEDLDLRDDSLLKNLDIRCIRS LNGCRVTDEILHLVPNIDNFRLTLRAIKLWAKRHNIYSNILGFLGGVSWA MLVARTCQLYPNAIASTLVHKFFLVFSKWEWPNPVLLKQPEECNLNLPVW DPRVNPSDRYHLMPIITPAYPQQNSTYNVSVSTRMVMVEEFKQGLAITDE ILLSKAEWSKLFEAPNFFQKYKHYIVLLASAPTEKQRLEWVGLVESKIRI LVGSLEKNEFITLAHVNPQSFPAPKENPDKEEFRTMWVIGLVFKKTENSE NLSVDLTYDIQSFTDTVYRQAINSKMFEVDMKIAAMHVKRKQLHQLLPNH VLQKKKKHSTEGVKLTALNDSSLDLSMDSDNSMSVPSPTSATKTSPLNSS GSSQGRNSPAPAVTAASVTNIQATEVSVPQVNSSESSGGTSSESIPQTAT QPAISPPPKPTVSRVVSSTRLVNPPPRSSGNAATSGNAATKIPTPIVGVK RTSSPHKEESPKKTKTEEDETSEDANCLALSGHDKTEAKEQLDTETSTTQ SETIQTAASLLASQKTSSTDLSDIPALPANPIPVIKNSIKLRLNR Simboli
C: Cistein D: Asparaginska kiselina E: Glutaminska kiselina F: Fenilalanin G: Glicin H: Histidin I: Izoleucin K: Lizin L: Leucin M: Metionin N: Asparagin P: Prolin Q: Glutamin R: Arginin S: Serin T: Treonin V: Valin W: Triptofan Y: Tirozin
Kloniranje i ekspresija Poliadenilacija tri osnovna kraja eukariotskih iRNK je ključni događaj koji se odvija u jedru tokom sazrijevanja iRNK. Reakcija se odvija u dva različita koraka: endoribonukleolitsko cijepanje pre-RNK na poli(A) mjestu, nakon čega slijedi sinteza poli(A) repa na 3-osnovnom kraju gornjeg produkta cijepanja. Poli (A) polimeraza (PAP) potrebna je za reakciju dodavanja adenozina (sažetak Thuresson et al., 1994).
Koristeći RT-PCR za citoplazmatsku RNK iz primarnih ljudskih fibroblasta, Thuresson et al. (1994) dobili su cDNK koja kodira PAP. Izvedeni protein od 500 aminokiselina je 99% sličan goveđoj sekvenci. Western blot analiza ekstrakata HeLa ćelija otkrila je proteine otporne na toplotu od 100 i 106-kD u jedarnim i citoplazmatskim frakcijama, te 90-kD-ni protein osjetljiv na toplotu u jedarnim frakcijama. Protein od 106 kD je fosforiliran. Funkcionalna analiza mutiranih peptida pokazala je da je N-terminalni region PAP potreban za nespecifičnu aktivnost polimeraze, dok su i N– i C-krajevi potrebni za specifičnu aktivnost polimeraze.Thuresson, A.-C., Astrom, J., Astrom, A., Gronvik, K.-O., Virtanen, A. Multiple forms of poly(A) polymerases in human cells. Proc. Nat. Acad. Sci. 91: 979-983, 1994. PubMed: 8302877
Reference
Dopunska literatura
Kategorija:Geni na hromosomu 14 Kategorija:Ljudski proteini Kategorija:Proteomika