Temat Zwiastowania El Greco podejmował wielokrotnie. Po raz pierwszy jeszcze w 1570 roku podczas swojego pobytu w Wenecji. Powstało wówczas Zwiastowanie z wyraźnymi cechami stylu Tycjana. Obraz z kolegium jest już zupełnie odmienny, pozbawiony typowych ikonograficznych elementów dla tego tematu: brak w nim lilii występujących najczęściej dla zaznaczenia hortus clausus, brak w nim również elementów architektury prócz stopnia i wysokiego pulpitu na którym leży otwarta księga. Madonna, zwrócona do Archanioła Gabriela, wydaje się pozbawiona ciała a jej sylwetka podtrzymywana przez fałdy szaty, tak jak u większości wizerunków świętych El Greca. Maria jest bardzo młoda, ma delikatne rysy twarzy, oczy zalane łzami zwrócone w stronę anioła, który z kolei ma oczy spuszczone. On również jest młodzieńcem, wąskimi wydłużonymi stopami stojącymi na skale o wąskiej głowie z lokami, z drobną cofniętą brodą i ogromnymi skrzydłami. El Greco maluje go z nietypowym gestem rąk. Przeciwnie jak inni artyści ręce anioła są skrzyżowane, choć gest ten zarezerwowany był dotychczas dla Marii. Madonna ma otwarte ręce, dłonie skierowane na zewnątrz z typowym dla artysty gestem: jedna wyciąga się ku aniołowi a druga wysuwa delikatnie palec do przodu.