2. Granica Królestwa Polskiego i lennego Księstwa Pruskiego w latach 1525–1657 pokrywała się z granicami ustalonymi II pokojem toruńskim w 1466 roku (pomiędzy Królestwem Polskim i Prusami Zakonnymi). Traktat krakowski z 1525 roku przekształcił Prusy Zakonne w lenne świeckie Księstwo Pruskie.
Granica rozpoczynała się nad Zalewem Wiślanym u ujścia rzeki Pasłęki, na północ od Braniewa. Następnie biegła w kierunku południowo-wschodnim nieco za Reszel. Obierała tu kierunek południowo-zachodni, biegła na wschód od Biskupca i dochodziła do jeziora Pluszne. Następnie na wschód od Olsztynka podążała z nurtem rzeki Pasłęki w kierunku północno-zachodnim do Pasłęka. Stąd podążała przez jezioro Drużno, na wschód od Dzierzgonia (Kiszporku) i na północ od Kwidzyna dochodziła do Wisły, następnie nurtem Wisły, by na północ od Grudziądza skierować się w kierunku wschodnim, tworząc liczne wybrzuszenia i zmieniając kilkakrotnie kierunek dochodziła do rzeki Wkry na południe od Działdowa i Nidzicy.