W 1964 roku kolekcje zabytkowych pojazdów przeniesiono do zajezdni Pankrác a później do zajezdni Vokovice. 12 września 1965 roku odbyła się jubileuszowa jazda na trasie z I.P. Pavlova do Parku Kultury. Od 1969 myślano o tym, żeby tory 25 – 30 zajezdni Vokovice, które dotychczas służyły głównie jako lakiernia i warsztat naprawczy, będą wykorzystane jako muzeum. W 1969 i wiosną 1971 roku przeniesiono pojazdy z zajezdni Pankrác do zajezdni Vokovice. 28 września 1975 odbyła się jubileuszowa jazda na trasie Radlická – Park Kultury. W latach 1991–1992 w zajezdni Vokovice organizowane są łącznie 24 wystawy.
Od 1 września 1992 przestano w zajezdni Střešovice wysyłać pojazdy na linie i skoncentrowano tu zbiór pojazdów z zajezdni Vokovice. 14 maja 1993 nastąpiło oficjalne otwarcie muzeum.
Działanie thumb|left|Tramwaj na muzealnej linii 91 (dziś 41) Muzeum jest czynne w soboty i niedziele w sezonie letnim (około kwiecień – listopad). Za prawym łukiem od bramy znajduje się historyczny przystanek tramwajowy dla linii 41 (wcześniej 91, jednak w związku z uruchomieniem linii trolejbusowej nr 58 i przenumerowaniem linii nocnych z zakresu 5x na 9x, linia otrzymała numer 41).