Wielonarodowość i wielokulturowość Sejny od wieków zamieszkują nie tylko Polacy. Gdy zostało założone, dla rozpowszechnienia handlu i przemysłu, sprowadzono Żydów, którzy zasiedlali je do II wojny światowej (w 1897 roku stanowili 50% mieszkańców, a w 1931 24%Demografia – Sejny.). Mieszkali i nadal mieszkają w Sejnach także Litwini (7,9%). Miasto zamieszkiwali również Rosjanie, Niemcy, Białorusini oraz wiele innych. Każda z tych narodowości wniosła do życia miasta własną kulturę i tradycję.
Litwini W Sejnach znajduje się konsulat Republiki Litewskiej, działa szkoła podstawowa z litewskim językiem nauczania Žiburys („Światełko”), która prowadzi także przedszkole.
Historyczna i współczesna struktura ludności Według spisu rosyjskiego z 1897 r. struktura ludności była następująca:
Żydzi – 50,8% (1918); Polacy – 40,4% (1528); Litwini – 4,2% (160); Rosjanie – 2,5% (95); Niemcy – 2,0% (75); 1 Białorusin i 1 Tatar
Według spisu polskiego z 1921 r.:
Polacy – 76,0% (1714); Żydzi – 17,7% (399); Litwini – 5,0% (112); Rosjanie – 0,7% (15); Niemcy – 0,5% (12); Białorusini – 0,1% (2)
Według spisu polskiego z 2002 r.:
Polacy – 90,9% (5466); Litwini – 7,9% (474); Rosjanie – 0,2% (12); Inni – 1,0% (58).