Tutaj także, do roku 1862, przechowywany był obraz Zwiastowanie autorstwa Fra Angelico, który to w 1611 r. otrzymał w prezencie od rodziny Farnese książę Lermy, a który obecnie można podziwiać w Muzeum Prado. Ściany zdobią obrazy manierystów hiszpańskich Alonsa Coello, Juana Pantoja de la Cruz, Bartolome Gonzaleza, Rodriga Villandrando oraz wielkich malarzy złotego wieku m.in. José Jiméneza Donoso i Claudio Coello. Nisze wypełniają ołtarze bogato zdobione złotem, koralem i malowidłami. Sąsiadują z nimi dzieła mistrzów niderlandzkich (Jana Brueghla Aksamitnego i Rubensa) oraz włoskich (Tycjan). Można podziwiać niezwykłe i kosztowne dary pochodzące z różnych zakątków Imperium Hiszpańskiego z Sycylii, Meksyku, Peru, Filipin, czy Indii (Goa), oraz portrety dzieci króla Polski Zygmunta III Wazy, przesłane Filipowi III jako wyraz solidarności rodzinnej (królowa Hiszpanii Małgorzata i królowa Polski Konstancja były siostrami).