Biblioteka gromadzi zbiory ze wszystkich dziedzin wiedzy oprócz rolnictwa i medycyny, które są gromadzone w oddzielnych bibliotekach narodowych. Zbiory liczyły (2019) 170 milionów woluminów w 470 językach. Ze zbiorów mogą korzystać nie tylko kongresmeni, ale także na miejscu studenci i uczniowie szkół średnich (po wykazaniu, że danych zbiorów nie ma w innych bibliotekach i na prośbę dyrektora szkoły). Od 1994 roku biblioteka realizuje National Digital Library Program, którego celem jest udostępnienie historycznych zbiorów związanych z historią Stanów Zjednoczonych. W 2021 roku została zakończona digitalizacja zbiorów dokumentów związanych z kolejnymi 23 prezydentami. Czytelnikom na stronie internetowej udostępniono 3,3 miliona zdjęć.
Egzemplarz obowiązkowy Zgodnie z przepisami (Copyright Law of the United States of America) przy bibliotece działa Urząd ds. Praw Autorskich (Copyright Office), do którego każdy wydawca (właściciel praw autorskich lub wyłącznego prawa do publikacji dzieła w Stanach Zjednoczonych) ma obowiązek przekazać 2 egzemplarze każdego wydawnictwa w ciągu trzech miesięcy od daty jego wydania. Publikacjami tymi zarządza Biblioteka Kongresu.