Zespół nagrał pierwsze demo w lipcu 2000 roku i z tym materiałem wyruszył na trasę po wschodnim wybrzeżu USA. Grali m.in. z Queens of the Stone Age, Morbid Angel i Cannibal Corpse. Ich występy wzbudziły ogromne zainteresowanie, co doprowadziło wkrótce do podpisania kontraktu z wytwórnią płytową Relapse.
Wiosną 2001 roku Mastodon wyruszył w kolejną trasę. We wrześniu 2001 wyszedł ich debiutancki EP Lifesblood. Koncerty cieszyły się ogromną, jak na debiutantów, popularnością. W październiku grupa weszła do studia, by nagrać pierwszy pełny album Remission, wydano go w maju następnego roku. Wkrótce po premierze w maju 2002 roku, zespół spędził w trasach koncertowych (USA i Japonia). W roku 2003 wyruszyli na swoje pierwsze koncerty po Europie oraz na pierwszą trasę po Stanach jako główny zespół, a nie jako support jak dotychczas.
Jesienią 2003 roku utwór March of the Fire Ants ukazał się na dwupłytowej kompilacji sygnowanej przez jeden z programów stacji MTV2: Headbangers Ball. Znaleźli się tam w towarzystwie: Slayer, Deftones, Hatebreed, Killswitch Engage i wielu innych. Płyta sprzedała się w ilości 150,000 egzemplarzy i dała zespołowi nowych fanów.