17 marca 1861 proklamowano utworzenie Królestwa Włoch. Stany Zjednoczone uznały to państwo 11 kwietnia 1861, za prezydentury Abrahama Lincolna i tego samego dnia nawiązały z nim stosunki dyplomatyczne. Za stosunki z nowym państwem odpowiedzialne zostało Poselstwo Stanów Zjednoczonych w Turynie, w jego stolicy. Wraz z przenoszeniem stolicy Królestwa Włoch, przenoszono amerykańskie poselstwo w 1865 do Florencji i w 1871 do Rzymu.
W 1893 Poselstwo Stanów Zjednoczonych w Rzymie zostało podniesione do rangi ambasady. 11 marca 1894 listy uwierzytelniające złożył pierwszy ambasador Stanów Zjednoczonych w Rzymie Isaac Wayne MacVeagh.
11 grudnia 1941 Włochy wypowiedziały wojnę Stanom Zjednoczonym, zrywając tym samym stosunki dyplomatyczne. Stanowisko ambasadora Stanów Zjednoczonych w Rzymie wakowało wówczas od 6 października 1941, a 6 grudnia 1941 odwołany został chargé d’affaires.
Stosunki dyplomatyczne zostały wznowione 16 października 1944. 8 stycznia 1945, wraz z przybyciem ambasadora, ponownie otworzono ambasadę Stanów Zjednoczonych w Rzymie.